Nashville Ultra terdiri dari lomba 50 mil dan 50K, keduanya menggunakan rute yang terdiri dari jalur pejalan kaki dan jalur sepeda yang beraspal. Seluruh rute merupakan bagian dari sistem Greenway yang luas di Nashville. Rute ini mencakup jembatan pejalan kaki yang melintasi Sungai Cumberland di dua titik yang berbeda. Rute ini juga melewati Nissan Stadium, markas tim NFL Tennessee Titans dan markas sementara Nashville Soccer Club.